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Dou SPTM 免疫组化两重染色步调

公布工夫:2013-3-18 10:49:22

Dou SPTM免疫组化两重染色试剂盒接纳经亲和层析纯化并生物素化的二抗取链霉菌抗生物素卵白-碱性磷酸酶和链霉菌抗生物素卵白-过氧化物酶交联,应用差别酶催化差别底物产死不同颜色的沉淀物去特异天回响反映构造和细胞中差别抗原的存在状况。其染色步调以下: 
1、白腊切片脱蜡、水化,自来水冲刷; 
2、凭据第一抗体的要求,对构造停止响应的抗原修复; 
3、撤除PBS,切片上滴加过氧化物酶阻断试剂,室温下孵育10分钟。PBS冲刷3×3分钟; 
4、撤除PBS,切片上滴加一般非免疫植物血清,室温下孵育10分钟; 
5、撤除血清,切片上滴加第一抗体,室温下孵育60分钟。PBS冲刷3×3分钟; 
6、撤除PBS,切片上滴加生物素符号的第二抗体,室温下孵育10分钟,PBS冲刷3×3分钟; 
7、撤除PBS,切片上滴加链霉菌抗生物素卵白-碱性磷酸酶试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲刷3×3分钟。 
8、撤除PBS,切片上滴加BCIP/NBT显色试剂显色,蒸馏水冲刷停止显色,PBS冲刷3×3分钟; 
9、撤除PBS,切片上滴加双染加强试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲刷3×3分钟; 
10、撤除PBS,切片上滴加一般非免疫植物血清,室温下孵育10分钟; 
11、撤除血清,切片上滴加另一个第一抗体,室温下孵育60分钟,PBS冲刷3×3分钟; 
12、撤除PBS,切片上滴加生物素符号的第二抗体,室温下孵育10分钟,PBS冲刷3×3分钟; 
13、撤除PBS,切片上滴加链霉菌抗生物素卵白-过氧化物酶试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲刷3×3分钟; 
14、撤除PBS,切片上滴加新颖配制的AEC显色试剂显色; 
15、自来水冲刷停止显色,苏木素复染,PBS返蓝,水性封固剂封固。